分泌性中耳炎与许多病症比较相似，治疗起来不同，需要鉴别：
（1）急性中耳炎
婴幼儿及儿童分泌性中耳炎应与急性化脓性中耳炎相鉴别，尤其是处于早期时。急性化脓性中耳炎多病程较短，患者可有剧烈耳痛、耳流脓等症状，分泌性中耳炎多病程较长，多以耳闷为主要症状，耳痛呈间断性，较轻，甚至无耳痛表现。
（2）鼻咽癌或鼻咽部占位性病变
典型的鼻咽癌早期症状可为涕中带血、颈部包块。但有些患者首先出现分泌性中耳炎的症状，癌肿在鼻咽部的黏膜下潜行，鼻内镜检查在早期不易发现。因此对于单侧分泌性中耳炎的成人患者，应高度警惕。
（3）慢性化脓性中耳炎合并中耳胆脂瘤
此种情况下中耳内产生胆脂瘤样物质，可以导致松弛部穿孔被胆脂瘤痂皮覆盖，耳内镜检查有时不易区别，此时可行颞骨的高分辨率 CT，以除外中耳胆脂瘤。
（4）自发性或外伤性脑脊液耳漏
检查显示鼓室内液体积聚，与分泌性中耳炎类似。根据病史、查体及影像学检查可以确诊。外伤性者则有明确的外伤史。
（5）外淋巴漏
内耳破裂和先天性裂隙，造成外淋巴液漏至中耳鼓室腔。可表现为鼓室积液，但患者有眩晕病史，遇强声刺激可诱发眩晕，听力检查提示感音神经性耳聋（声音传入大脑的过程可以分两步，外耳中耳里有像喇叭、鼓、鼓锤这样的结构，内耳则是像电话线的神经传导声音，里面的电话线路部分有问题就是神经性耳聋。包括产生听觉电位的听觉毛细胞、听神经或各级听觉中枢出现异常）。
（6）胆固醇肉芽肿
患者主诉听力减退和耳闷胀感。但耳内镜检查可见鼓膜呈蓝色，颞骨 CT 提示鼓窦入口狭窄，可有骨质破坏。手术探查及病理检查可以明确诊断。
（7）其他少见疾病如鼻部恶性肉芽肿、梅尼埃病、上半规管裂综合征等。
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